[Pilze] Kulturpilze vermehren - steril

[Gast1513]

Im nachfolgenden Theat habe ich mal beschrieben wie man Pilze klont und Brut herstellt.
Ich habe nur geschrieben welchen Weg ich genommen habe und möchte auf keinen Fall behaupten das es nicht auch noch andere Wege gibt.

Viele Grüße Matthias

[Gast1513]

Da hier im Forum das Interesse zum Pilze klonen besteht werde ich mal einen kleinen Überblick machen wie so was Funktioniert, sicher werden viele nicht gleich Verstehen wie man genau arbeiten soll deshalb werde ich auch Versuchen mich so verständlich wie möglich Auszudrücken.

In der freien Natur vermehren sich Pilze durch Sporen ich werde hier nur auf die vegetative Vermehrung durch ein Stück Pilz das aus dem inneren des Pilzes entnommen wird schreiben.
Natürlich kann man das auch mit einen Impfdübel oder 1-2 bewachsenen Körnern Körnerbrut machen. Ich beschreibe hier ausschließlich das sterile Vermehren!

Das Zubehör:
Natürlich braucht man ein Medium auf dem das Mycel wachsen soll, am meisten wird dazu Malzextrakt Agar und Kartoffeldextrose Agar verwendet. So was kann man fertig bei www.zuchtbedarf.de beziehen. Entweder schon fertige sterile Petris oder aber auch als Trockennährboden zum selber Herstellen.
Weiter hin braucht man ein Skalpell, Pinzette evl. eine Impfnadel, einen 5cm bereiten Streifen Frischhaltefolie zum selber gießen eine Einwegspritze einen Bunsenbrenner oder ein Sturmfeuerzeug wie ich es verwende und einen Dampfkochtopf. Will gleich vorne weg nehmen das man um den Schnellkochtopf nicht herum kommt da ja kaum einer einen Autoglaven besitz. Denn nur mit so einen Schnell bzw. Dampfkochtopf kann man Temperaturen von ca. 120°C erreichen um halt wirklich einen sterilen Nährboden oder Körnerbrut herzustellen

Von Links Impfnadel, Skalpell, Pinzette, Sturmfeuerzeug, Wasserstoffperoxidlösung

[Gast1513]

Das selber gießen von Petris und Kulturröhrchen (schräg Agar)
Um das Thema etwas kürzer zu halten gehe ich mal von einem fertigen Trockennährboden aus.
Dieser wir nach Herstellerangaben in Wasser eingerührt und kurz aufgekocht. Dann noch heiß mit Hilfe einer Spritze in die Glaspetris bzw. Röhrchen gefüllt. Die Petris sollten eine Füllhöhe von 3-5 mm haben, bei den Röhrchen muss man ausprobieren da diese zum erkalten schräg gelegt werden um so eine größere Oberfläche zu erhalten. Es ist darauf zu achten das kein Nährboden über den Rand läuft da sonst die Gefahr von Kontaminierung (Konti) besteht.

Von rechts nach links Verschluss 2 Röhrchen (mit Filterwatte und fertig umwickelt) Frischhalte Folie, Glaspetri.
Nachdem der Nährboden erkaltet ist werden die Petris in Alufolie eingewickelt, die Röhrchen bekommen einen Verschluss mit Filterwatte und werden extra noch mit Alufolie umwickelt. Die zu den Röhrchen gehörenden Schraubverschlüsse werden Extra in Alufolie eingepackt.
Danach werden die Petris und Röhrchen (die man in ein kleines Marmeladenglas stellt) im Dampfkochtopf für 15-20min. auf der größten Stufe sterilisiert (die Zeit beläuft sich ab dem Zeitpunkt wenn der Topf den vollen Druck hat). Bitte vergesst den Einsatz ggf. Abstandhalter nicht, es darf nicht den Rand oder Boden des Topfes berühren es würde sonst kaputt gehen!
Wenn die Zeit um ist den Topf Vorsichtig auf ein kaltes Kochfeld ziehen der Druck sollte sich von selber abbauen also nicht das Ventil öffnen da sonst der Nährboden überkocht.
Wenn das geschehen ist werden die noch heißen Petris vorsichtig ausgepackt und mit Frischhaltefolie umwickeln, die Röhrchen werden zum erstarren schräg gelegt. Nach dem erstarren des Nährbodens über Wasserdampf mit dem sterilen Schraubverschluss verschließen.

Fertig durchwachsene Petris und Röhrchen

[Gast1513]

Das klonen.
Zum klonen braucht man am Anfang nicht unbedingt eine Impfbox. Man bringt einfach einen Topf mit Wasser zum kochen, über dem Wasserdampf wird dann die Petrischale leicht geöffnet und mit 1-2 kleinen Pilzstücken die aus dem inneren des Pilzes sind bestückt.
Der Pilz wird einfach auseinander gerissen und man schneidet mit dem vorher ausgeglühten Skalpell kleine Stücke heraus. Extra kann man dieses Stück in 3% Wasserstoffperoxid Lösung für 2-3 sek. Tauchen (bekommt man in der Apotheke).
Die Stücke über Wasserdampf auf den Nährboden legen und leicht andrücken, danach gleich wieder mit Frischhaltefolie umwickeln. Die so bestückten Petris werden warm und dunkel gelagert (24°C-26°C sind ideal). Man sollte die Petris täglich kontrollieren, wenn sie schwitzen einfach auf dem Deckel legen damit das Schwitzwasser nicht auf dem Nährboden steht. Durch wachsenen Petris kommen zur Winterruhe in den Kühlschrank wo sie etwa 3 Monate gelagert werden können.

Impfbox Marke eigen Bau

[Gast1513]

Lagerung und überimpfen von Mycel
Nicht immer klappt es sauberes und gesundes Mycel herzustellen deshalb kann es schon mal passieren das man überimpfen muss. Dazu schneidet man von dem mit gesunden Mycel bewachsenen Nährboden ein kleines Stück heraus (so wie beim Klonen beschrieben) und bringt es auf eine neue Petri auf.
Da Petris nur eine recht kurze Lagerfähigkeit haben kann man die oben beschrieben Kulturröhrchen mit Mycel beimpfen, wenn diese gut bewachsen sind sollen sie etwa 1-1,5Jahre im Kühlschrank haltbar sein (hierzu braucht man schon eine Impfnadel oder Öse)

Hier eine Petri mit Kontis (oben) im unteren Teil würde schon ein Stück zum überimpfen entnommen.

[Gast1513]

Flüssiges Mycel
Eine weitere Möglichkeit ist flüssig Mycel.
Man braucht dazu ein kleines sauberes Marmeladenglas, in den Schaubdeckel wird mit einen Nagel oder was ähnlichen ein Loch gemacht, das dient als Druckausgleich und späteres Loch für die Kanüle.
Man füllt dann 100ml warmes Wasser ein und einen Teelöffel flüssigen Honig (so was wie Flotte Biene). In das Glas kommt dann noch eine Glasscherbe, damit man wenn es mit Mycel durchwachsen ist das Mycel zerkleinern kann (schütteln).
Das Glas wird dann verschlössen und in Alufolie gewickelt 25min im Dampfkochtopf sterilisiert (den Einsatz nicht vergessen).
Nach dem sterilisieren wird das Loch mit Klebeband verschlossen, wenn die Flüssigkeit kalt ist kann dann mit einen kleinen Stück Mycel beimpft werden. Es soll auch gehen wenn man einen Dübel oder 1-2 beimpfte Körner rein tut nur habe ich damit keine Erfahrung.
Alternativ kann man sich auch 5%Glucoselösung in der Apotheke kaufen.
Wenn die Lösung durchwachsen ist kommt das Glas in den Kühlschrank. Man kann es aber auch gleich auf Einwegspritzen füllen, diese dann mit einen Spritzenstopfen verschließen und so Portionsweise im Kühlschrank lagern. Die Haltbarkeit soll über 1 Jahr sein, habe schon gelesen das so ein Teil noch nach 3,5Jahre brauchbares Mycel enthielt.

Hier ein Foto von einen flüssigen Ansatz 5 Tage alt, wenn man genau hinschaut sieht man das Stück Nährboden wo sich schon ein schöner Flaum herum gebildet hat.

Spritze, Kanüle und Verschluss

[Gast1513]

Herstellen von Körnerbrut
Für die Herstellung von Körnerbrut eignen sich am besten Roggen, Hirse und Weizenkörner.
Man braucht dazu nur ein etwas Größeres Glas mit Schraubdeckel (Rotkraut oder Gurkenglas), in den Deckel kommt wieder ein Loch.
Die Körner werden 15min gekocht das Wasser abgegossen und die Körner in das Glas gefüllt, etwas mehr wie halb voll. Das Glas verschließen und wieder mit Alufolie umwickeln für 45min im Dampfkochtopf sterilisieren.
Wenn der Druck von Topf runter ist gleich das Loch mit Klebeband verschließen, wenn die Körner erkaltet sind kann geimpft werden.
Hier sind gibt es mehrere Möglichkeiten, klein geschnittenes Mycel von Petri oder Röhrchen, flüssig Mycel oder gar die Weitervermehrung mit einen Rest Körnerbrut oder Dübelbrut.
Die Gläser zum Durchwachsen dunkel und warm stellen (siehe Petris).
Wenn das Mycel eingewachsen ist kann man die Brut einige Tage im Kühlschrank lagern, man sollte es aber so schnell wie möglich auf Substrat impfen da z.B. Rosenseitlingsbrut nicht lange Lagerfähig ist.

[trude]

Nun hab ich mal eine Frage:
Poseidon hat auf seiner Seite ein Foto mit einem ganzen Stück Pilz auf Kaffesatz, Holzspan, Wellpappe.. - und es sind Pilzausläufer zu sehen (Tschuldigung, Fachbegriffe schlag ich später nach..-)
Ich hab auch von Agar Nährböden gelesen mit Hundefutter - ich hab ne Katze und wollte es mit Brekkies probieren.
Also meine Idee lautet wie folgt:
Agar (reden wir hier von dem Dickungsmittel ??)mit Brekkies als Nährboden - Kaffesatz ist natürlich auch täglich vorhanden , einen gekauften Kräuterseibling (zum Beispiel) halbieren, das Innere mit einem Skalpell stückeln und auf den Nährboden aufbringen. Und dann warten. Natürlich alles möglichst steril und sämtliches Zubehör wie bei Marmelade erhitzt.
Nein, ich habe keine Spülmaschine, ja, es gibt einen Dampfdruckkochtopf.
Ohje, 1.1.2011. Bin vielleicht nicht ganz auf der Höhe. Aber dieses Jahr werde ich PILZE ZÜCHTEN! - mit Deiner und Poseidons Hilfe

In das Glas kommt dann noch eine Glasscherbe, damit man wenn es mit Mycel durchwachsen ist das Mycel zerkleinern kann (schütteln).

???

Kennt Ihr das :
Wieso hab ich das denn nicht von Muddi gelernt, sowie Kekse backen, Karpfen blau, Rehrücken, Marmelade kochen... - dann wär das alles viiiel einfacher!

[Gast1513]

Moin
Hatte im vorraus darauf hingewiesen das es nicht einfach ist ein Thema wie Klonen zu beschreiben.
Deshalb habe ich mich auch schwer getan so einen Theat hier zu eröffnen.
Allerdings scheint eine Nachfrage dazu da zu sein, wenn auch eher gering.

Meinen Entschluss es nun doch zu tun hat auch einen anderen Hintergrund, ich erhoffe mir dadurch einen reinen 2Theat der nur mit dem Anbau von Pilzen zu tun hat also das Thema was im ursprünglichen Beitrag "Projekt Pilzgarten" angefangen wurde!
Ich finde damit den Interessierten Gartenfreunden einen größeren gefallen zu tun als wenn ein Heilloses durcheinander in einen Beitrag statt findet.
Bitte glaubt mir diese Entscheidung viel mir echt nicht leicht.
Viele Grüße Matthias

[Gast1513]

Hallo trude
Poseidon vermehrt unsteriel, geht bei einigen Sorten auch (Austern) aber lass dir das lieber von ihm erklären.

Agar Agar ist ein aus Algen gewonnenes Geliermittel, der Vorteil zu der aus Schweineschwarte gewonnen Gelantine ist das es auch nach mehrmaligen erhitzen wieder geliert.

Ja man kann mit Hunderfutter Nährböden herstellen aber mit welchen weiß ich nicht, persönlich habe ich nur Bieragar und Kartoffeldextroseagar gekocht. Kaufe mir jetzt bei Zuchtbedarf fertige Trockennährböden und mache mir die nach Bedarf an.

Viele grüße Matthias

[poseidon]

Flüssiges Mycel

und wieviel FlüssigMycel brauchst du für welche Menge Anzucht-Substat, welche dann wohl im Unsterilen Verfahren (anderer Thread) stückweise vermehrt werden muss, bis zum endgültigen Beimpfen der HolzStämme bzw. 5- oder mehr-ltr-Substratsäcke, oder Strohballen.

[poseidon]

Flüssiges Mycel
Nach dem sterilisieren wird das Loch mit Klebeband verschlossen, ...
Wenn die Lösung durchwachsen ist kommt das Glas in den Kühlschrank.

Ich habe eine Anzahl Gläser, an die über einen Drahtring der Glasdeckel direkt angesetzt ist, über Gummiringe sind sie abgedichtet.
waere das ok. nur kann kein Loch gebohrt werden.

[Gast1513]

Hallo Poseidon
Die auf Nährböden und flüssig Nährböden angezogenen Mycelien dienen eher zur Anzucht auf einen Brutträger gleich ob es Impfdübel, Substratbrut oder Körnerbrut werden soll. Die Verwendung dieser auf unsterilen Medien könnte schon gehen, nur habe ich mich in diese Richtung nicht beschäftigt.
Zu deiner Frage wie viel ml flüssig Mycel man braucht kann ich dir keine Korrekte Angabe machen, habe in etwa die gleiche Frage mal im Kulturpilz Forum gebracht zwar speziel auf die Füllung einer Petrischale bezogen. Die Antwort jedenfalls war so Verwirrend das ich es auch nicht Verstanden habe.
Ich werde jedenfalls mit 5-10ml je 500g Roggenkörner arbeiten je nach Pilzsorte. Schnell wachsende Sorten wie Auster, Ulmen, Lungenseitling mit 5ml die langsamwachsenden z.B. Pom Pom mit 10ml wenn ich den je mal sauber hinbekomme.
Deiner 2 Frage zufolge gehe ich davon aus das entweder flüssig Mycel ansetzen willst oder halt Körnerbrut.
Das Loch im Schraubverschluß dient beim sterilisieren als Druckausgleich, wenn man davon ausgeht das in einen Schnellkochtopf 0,5 bis 1bar Druck sein kann wohl wichtig. Die Abdeckung mit Alufolie macht man damit kaum oder kein Wasserdampf oder Kondenswasser in das Glas kommt.
Vorteilhaft ist das Loch halt noch bei flüssig Kultur da man es gleich als Impfport nutzen kann.
Im übrigen ohne jetzt Schleichwerbung wachen zu wollen bei www.zuchtbedarf.de bekommt man auch fertiges flüssig Mycel zu kaufen.

Kann auch gleich mal berichten wie meins aussieht, alle 8 angestzten Sorten haben schöne Mycelquallen und das nach nur 6 Tagen, werde mal 1-2 Tage warten und dann mal schön schütteln damit sich die Mycelfäden schön auf die ganze Flüssigkeit verteilt und nicht nur einen klumpen bilden.
Deshalb auch die Glasscherbe.
Viele Grüße Matthias

[Gast1639]

Hallo Matthias,

danke für diesen außergewöhnlichen, komprimierten und höchst informativen Thread, der Klasse ist.

Ich komme mir gerade vor, als sei ich in einem ganz anderen Forum unterwegs. Nah egal, nicht so schlimm, denn es wurde ja so gewünscht. Was ich ganz klasse an dem Thread finde, das ich hier alles vereint vorfinde (einschließlich gelungener Fotodokumentation), was ich mir in einem Spezialforum, mühselig über wochenlange Arbeit zusammensammeln müsste, finde ich hier vereint vor.

Matthias, sicherlich hast Du auch im unsterilen Thread gelesen. Demzufolge gehe ich noch in den Kindergarten, gut, kann man ja auch an meinem Alter erkennen. Danke für die Aufklärung, Poseidon. Wenn da doch bloß nicht dieser Monstertopf von Schnellkochtopf wäre , der nun mal erforderlich ist, dann würde ich hier glatt weg mitspielen. Mit dieser Höllenangst vor diesem Teil, komme ich nie in die Grundschule. Okay, ich lass mich nochmal ein Jahr zurückstellen.

So Ihr Beiden, seit hübsch artig hier, nicht das ich dudu machen kommen muss.

[Gast1513]

Hallo Wolfspitz
Kindergarten ist nicht ganz richtig du hattest doch nur Körnerbrut gekauft aber dein Strohsubstrat selber angesetzt also Vorschulkind paßt ja zu deinen Alter
Ja jetzt war ich Böse und muß Rote Beete essen weil ich die überhaupt nicht mag
Frage mich echt warum du vor so einen Schnellkochtopf Angst hast nicht das ich dich jetzt zum Pilze Klonen bewegen will aber die Dinger sind doch sicher sonst würden die nie im Laden verkauft. OK habe auch schon gehört das es Leute gibt die nicht warten konnten bis der Druck runter war und ihr essen dann an der Decke gefunden haben aber esgibt auch welche dielassen sich unter Druck gar nicht öffnen. Ich weiß jetzt gibt es gleich nochmal Rote Beete zur Strafe und mächtig tutu.
Viele Grüße Matthias

[trude]

So Ihr Lieben, ich hab einfach mal angefangen:
Austernpilz gekauft, 3 prozentige Wasserstoffperoxid - Lösung und Brennspiritus (hatte ich noch).
Nun hab ich statt Petrischalen ein Marmeladenglas (Deckel nur aufgelegt wegen Druckausgleich) abgekocht.
Darin befindet sich :
10 gr Agar
10 gr Breckies
30 gr Wasser
Alles aufgekocht im Wasserbad und nun steht es zum Abkühlen.
Aus der Gemüsetheke vom Supermarkt hab ich Auster besorgt. Die werde ich morgen aufbrechen, mit einem in Brennspiritus desinfizierten Küchenmesser ein Stück herausschneiden, dieses Stück Pilz kurz in Wasserstoffperoxid halten und dann auf die Glibbermasse legen und den Marmeladendeckel schließen.
Nun fehlt mir nur noch ein Ort, der über 20°C hat, damit der neue Pilz sich wohl fühlt..
Vielleicht etwas unkonventionell, doch ich probier es einfach. Ob es klappt? Mal sehen...

[trude]

Ps:
Ich hab die Auster gerade aufgebrochen (keine Geduld war schon immer meins), Küchenmesser in Spiritus getaucht und ein Stück Pilz selektiert, dieses Sück kurz in Wasserstoffperoxid (aus der Apotheke für 3,70€) getaucht und auf den Nährboden gedrückt. Nun steht das Glas im Badezimmer neben dem Thermostat bei durchgehend 20°C auf dem Spiegelrahmen im Dunkeln.
... Sieht echt schräg aus dieser Brekkies Glibber, aber vielleicht klappt es ja.
Petrischalen hätten sie in der Apotheke bestellen müssen für ca 3,70/ Stck+ Versand - die Zeit hatte ich heute nicht und so hab ich ein MarmeladenGlas genommen.
Bei mir ist es einfach wichtig, das ich anfange. Wenn es nicht klappt: - zumindest hab ich es versucht und weiß, woran es scheitert. Einfach machen -und dann nochmal neu starten

[BuddelNora]

Wenn du den Mumm hast, im Notfall nochmal neu zu starten, ist das ja die richtige Strategie.
Mir fehlt oft die Ausdauer, das nochmal zu probieren, deshalb lese und gugle ich vorher meist tagelang, um den richtigen/besten Weg für irgendwas zu finden

[trude]

Tja Buddelnora, lesen und googeln mach ich seit letztem Jahr, als Greizer angefangen hat, hier zu schreiben.
Ein Marmeladenglas, ein Kochtopf und Messer und Pinzette, Brennspiritus sowie kochendes Wasser sind tatsächlich Bestandteile des Haushalts. Allein Wasserstoffperoxid und Agar hab ich besorgt. Der Aufwand war also denkbar gering und einem neuen Versuch im Falle eines Fehlstarts steht garnichts im Weg. Mach doch mit..

[Gast1513]

Hallo trude
Ein Marmeladenglas ist schon ganz schön groß, da hättest du ja gleich flüssiges Mycel mit einen Stück vom Pilz ansetzen können.
Habe aber noch eine Idee für Leute die gerne mal einen kleinen Schnaps trinken. Diese kleinen flachen Feigling/ Jägermeister Flaschen kann man auch nehmen. Aber den Schaumstoff aus dem Verschluß raus nehmen der würde beim sterilisiern schmelzen und natürlich zum erstarren flach hinlegen.
Wasserstoffperoxid für 3,70€ hast du da gleich 1Liter gekauft oder die Apotheke mit, die auf dem Foto kam 0,69€.

@ Buddel Nova
Ich habe fast ein Jahr nach dem Thema gegoogelt um auf dem stand von jetzt zu sein, nicht das es wirklich so schwer ist nur vieles ist verworren geschrieben und vor allen die Abkürzungen H2O2, MEA, KDA und und und. Selbst der Bergriff überimpfen, ist nicht so einfach zu Verstehen sicher wenn du meinen Beitrag gelesen hast wirst du wissen dami ist nur gemeint wenn sich mal Bakterien oder Schimmel auf dem Nährboden wachsen und man ein sauberes mit Mycel bewachsenes Stück auf eine neue Petri setzt eigentlich danz einfach oder.